在植物基因功能研究中，反向植物遺傳學是經(jīng)典的研究思路之一，通常從一個基因入手，通過過表達、干擾或基因編輯等手段調(diào)節(jié)一個或多個基因的表達水平，觀察對應的表型變化，從而對相關(guān)基因進行一系列的分子功能研究。
       基因編輯技術(shù)主要是利用序列特異性核酸酶在特定基因位點產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂，借助編輯受體自身的DNA修復系統(tǒng)在非同源末端連接（Non-homologous end joining，NHEJ）過程中產(chǎn)生隨機的Indels （Small insertions and deletions）或在同源重組修復過程中插入或替換相應的基因片段，最終實現(xiàn)基因組序列的突變。現(xiàn)有的基因編輯系統(tǒng)主要包括鋅指核酸酶（Zinc finger nucleases，ZFNs）系統(tǒng)、類轉(zhuǎn)錄激活因子效應物核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALENs）系統(tǒng)以及CRISPR/Cas（Clustered regu-larly interspaced short palindromic repeat-associated protein）系統(tǒng)，其中，CRISPR/Cas系統(tǒng)由于載體構(gòu)建過程簡單、編輯效率高等優(yōu)點，成為當前廣泛應用的主流基因編輯系統(tǒng)。2020年，Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna兩位科學家獲得了諾貝爾化學獎，以表彰她們在“開發(fā)CRISPR/Cas基因組編輯方法”方面作出的貢獻。

       在植物體系中，我司目前主要使用自主研發(fā)并改造后的pCAMBIA系列載體（無知識產(chǎn)權(quán)歸屬問題，Cambia機構(gòu)已開放給任何人使用的權(quán)利，詳情請見網(wǎng)站 http://www.cambia.org/daisy/cambia/585）。
         我司原始基因編輯載體為雙元載體，并攜帶卡納原核抗性和真核篩選標記（可選潮霉素、Basta或G418進行篩選）。我們可以針對您想要編輯的靶序列，分析序列的各項參數(shù)后設(shè)計引物，選擇最合適的原始基因編輯載體，退火合成靶序列，再連入原始載體， 得到重組子后直接進行遺傳轉(zhuǎn)化實驗。

我司部分原始基因編輯載體列表。可根據(jù)不同的需求，選擇不同的啟動子及真核抗性的載體。

適用場景

1、 功能基因的敲除；
2、 非編碼區(qū)的編輯，例如對啟動子、microRNA、lncRNA的基因序列進行編輯；
3、 單堿基編輯、精準堿基編輯；
4、 非同源/同源多基因敲除、代謝通路多基因敲除；
5、 大片段刪除。

優(yōu)勢特點

1、 采用我司已被授權(quán)的國際PCT專利技術(shù)（專利號：US 10,144,936 B2）來進行sgRNA的片段組裝及無縫組裝，同時，對于單個、 多個sgRNA序列均可進行組裝；
2、 載體資源豐富，根據(jù)您研究的物種、靶序列，均有對應經(jīng)多次編輯效率測試后的最優(yōu)原始載體骨架推薦，也可個性化訂制您有其它需求的基因編輯載體；
3、 基因編輯載體庫中有多種真核篩選標記（可選潮霉素、Basta或G418進行篩選）的原始載體可供選擇，同時，多基因編輯、單堿基編輯、精準堿基編輯等特殊基因編輯系統(tǒng)也可滿足您的特殊實驗需求；
4、 載體均為雙元載體，可直接應用于后期單子葉和雙子葉遺傳轉(zhuǎn)化；
5、 可以與我司轉(zhuǎn)基因服務、檢測服務、蛋白服務等銜接，整個實驗可以暢通且快速地完成。

實驗周期

5-7個工作日

樣品接收標準

客戶下單及項目信息填寫：

在我司官網(wǎng)http://plant.biorun.com/進行注冊或登錄，請客戶按照頁面提示填寫項目名稱，選擇項目類型[CRISPR/Cas基因組編輯載體]、項目所需要的具體信息，價格由系統(tǒng)自動計算。

實驗信息

在實驗開始、結(jié)題關(guān)鍵節(jié)點系統(tǒng)會自動發(fā)送短信到申請人手機進行告知，實驗過程中客戶可以隨時登錄客戶管理系統(tǒng)査看項目實時進展情況。實驗結(jié)題后，實驗報告、檢測結(jié)果可在線査看，并永久保留。實驗過程用到的菌株、載體、受體材料免費為客戶保存半年后銷毀。

結(jié)題標準

目的片段構(gòu)建至目的載體上（俗稱“構(gòu)建成功”）。

實驗交付內(nèi)容

1、重組載體的全序列信息和注釋信息；
2、重組載體的酶切圖譜；
3、重組載體的測序結(jié)果；
4、重組載體：一份質(zhì)粒、一份大腸桿菌菌液（25%甘油菌）；
5、如果需要轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
1）2份農(nóng)桿菌菌液（25%甘油菌）
2）農(nóng)桿菌的檢測圖片。