在植物基因功能研究中，反向植物遺傳學是經典的研究思路之一，通常從一個基因入手，通過過表達、干擾或基因編輯等手段調節一個或多個基因的表達水平，觀察對應的表型變化，從而對相關基因進行一系列的分子功能研究。
       基因編輯技術主要是利用序列特異性核酸酶在特定基因位點產生DNA雙鏈斷裂，借助編輯受體自身的DNA修復系統在非同源末端連接（Non-homologous end joining，NHEJ）過程中產生隨機的Indels （Small insertions and deletions）或在同源重組修復過程中插入或替換相應的基因片段，最終實現基因組序列的突變。現有的基因編輯系統主要包括鋅指核酸酶（Zinc finger nucleases，ZFNs）系統、類轉錄激活因子效應物核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALENs）系統以及CRISPR/Cas（Clustered regu-larly interspaced short palindromic repeat-associated protein）系統，其中，CRISPR/Cas系統由于載體構建過程簡單、編輯效率高等優點，成為當前廣泛應用的主流基因編輯系統。2020年，Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna兩位科學家獲得了諾貝爾化學獎，以表彰她們在“開發CRISPR/Cas基因組編輯方法”方面作出的貢獻。

       在植物體系中，我司目前主要使用自主研發并改造后的pCAMBIA系列載體（無知識產權歸屬問題，Cambia機構已開放給任何人使用的權利，詳情請見網站 http://www.cambia.org/daisy/cambia/585）。
         我司原始基因編輯載體為雙元載體，并攜帶卡納原核抗性和真核篩選標記（可選潮霉素、Basta或G418進行篩選）。我們可以針對您想要編輯的靶序列，分析序列的各項參數后設計引物，選擇最合適的原始基因編輯載體，退火合成靶序列，再連入原始載體， 得到重組子后直接進行遺傳轉化實驗。

我司部分原始基因編輯載體列表。可根據不同的需求，選擇不同的啟動子及真核抗性的載體。

適用場景

1、 功能基因的敲除；
2、 非編碼區的編輯，例如對啟動子、microRNA、lncRNA的基因序列進行編輯；
3、 單堿基編輯、精準堿基編輯；
4、 非同源/同源多基因敲除、代謝通路多基因敲除；
5、 大片段刪除。

優勢特點

1、 采用我司已被授權的國際PCT專利技術（專利號：US 10,144,936 B2）來進行sgRNA的片段組裝及無縫組裝，同時，對于單個、 多個sgRNA序列均可進行組裝；
2、 載體資源豐富，根據您研究的物種、靶序列，均有對應經多次編輯效率測試后的最優原始載體骨架推薦，也可個性化訂制您有其它需求的基因編輯載體；
3、 基因編輯載體庫中有多種真核篩選標記（可選潮霉素、Basta或G418進行篩選）的原始載體可供選擇，同時，多基因編輯、單堿基編輯、精準堿基編輯等特殊基因編輯系統也可滿足您的特殊實驗需求；
4、 載體均為雙元載體，可直接應用于后期單子葉和雙子葉遺傳轉化；
5、 可以與我司轉基因服務、檢測服務、蛋白服務等銜接，整個實驗可以暢通且快速地完成。

實驗周期

5-7個工作日

樣品接收標準

客戶下單及項目信息填寫：

在我司官網http://plant.biorun.com/進行注冊或登錄，請客戶按照頁面提示填寫項目名稱，選擇項目類型[CRISPR/Cas基因組編輯載體]、項目所需要的具體信息，價格由系統自動計算。

實驗信息

在實驗開始、結題關鍵節點系統會自動發送短信到申請人手機進行告知，實驗過程中客戶可以隨時登錄客戶管理系統査看項目實時進展情況。實驗結題后，實驗報告、檢測結果可在線査看，并永久保留。實驗過程用到的菌株、載體、受體材料免費為客戶保存半年后銷毀。

結題標準

目的片段構建至目的載體上（俗稱“構建成功”）。

實驗交付內容

1、重組載體的全序列信息和注釋信息；
2、重組載體的酶切圖譜；
3、重組載體的測序結果；
4、重組載體：一份質粒、一份大腸桿菌菌液（25%甘油菌）；
5、如果需要轉化農桿菌
1）2份農桿菌菌液（25%甘油菌）
2）農桿菌的檢測圖片。